为什么测试时一些光谱给出十分强的背景信号,而这些信号湮盖了拉曼信号?
一些发荧光或磷光的样品在测量时会给出非常高的背景光谱。令人遗憾的是这些是样品材料的本征性质,是激光辐照下无法避免的结果,而且通常情况下荧光比拉曼信号更强。尽管这样,我们仍可采取一些措施减少或减轻荧光副作用。
猝灭:一些样品可采用测试前将激光辐照在表面一段时间对荧光进行猝灭以减小荧光光谱的背景增强拉曼信号。猝灭的时间根据样品不同可从几分钟到几小时。值得注意的是:猝灭效应是呈指数衰减的,一开始就可观察到。
共焦模式:采用共焦模式测量强光下辐照的小体积样品时荧光将会大大降低。该法也同样适合有荧光衬底的样品,廊坊布鲁克傅立叶拉曼,例如被荧光物质基体包裹的样品。
改变激发激光的波长:有时改变波长是仅有可行的避免荧光干扰的方法。
如果拉曼实验室里有太多的室内光源比如荧光、白炽灯或日光灯等,这会在测试光谱上出现不必要的背景信号。因此在测试的时候应将室内光关闭或降到很小或用遮光罩将样品台罩住以避免外界的杂散光进入光谱仪。
拉曼光谱仪搭建&维修
1. 光路平台倒置, 光学元件都是头朝下倒置着固定在上面的。而一般我们搭光路都是在光学平台上方正置,但这个等于把光学平台倒过来。
2. 785 nm 激光器坏了两次。
3. 内部胶水老化,拆开后竟然发现光栅掉脱落,反射镜脱离。这与光路平台倒置的设计也分不开。
4. 内部做工粗糙,简直粗制滥造。例如: 用银色胶带挡杂光。(漏光也就算了,为啥不用黑的)
5. 顶部是个弧形的热沉,为拆下倒置维修造成很大障碍,布鲁克傅立叶拉曼原理,弧形的热沉底,使修理很不稳定,需要借助外界固定。
拉曼光谱仪为什么待测样品的信号很弱?信噪比很差?
当进行样品测试时发现拉曼光谱信号很弱,首先要检查样品是否正确放置在显微镜下并且处于聚焦状态。你也可以将测试区域移到样品的另一个部位。同时检查仪器是否处于常规状态而不是处在共焦状态。如果激光功率小于100%,应尝试提高功率增强信号。如果光谱噪声很大,可采用增加扫描积分时间或积分次数来提高信噪比。
增加扫描积分时间可以让CCD获取更多的拉曼信号,增强整个无关噪声的特征。该法适宜于当背景和拉曼信号都低的情景。当两者都不强时,增加积分时间只会增加CCD探测器饱和的机会。
对几个特定的扫描光谱进行数据叠加可以增强随机背景噪声下的拉曼信号,布鲁克傅立叶拉曼公司,增加信噪比。
适当选择扫描积分时间和积分次数可获得很大可能的曝光度增加信噪比。不过要注意一点:信噪比跟积分次数的平方根成正比,叠加四次可获得二倍信噪比的提高。
另一个与信噪比密切相关的参数是信背比。如果背景部分很高,将会湮盖拉曼信号只给出系统噪声。
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